常見問題
- 構(gòu)建亞細胞定位載體時，目標蛋白連在熒光蛋白的N端更好，還是C端更好？
- 答：大部分文獻的亞細胞定位載體一般都是把目標蛋白連在N端，GFP放在C端；如果目標蛋白連在C端，在加工過程中有可能信號肽 會連同GFP一起被切掉 ，導致熒光淬滅，或熒光信號弱。也有少部分目標蛋白必須連在C端才有信號。極少的目標蛋白需要連入GFP中間才有信號。融合在熒光蛋白N端的目標蛋白一般無法得到過氧化物酶體的定位結(jié)果，融合在熒光蛋白C端的目標蛋白一般無法得到線粒體、質(zhì)體的定位結(jié)果。選擇融合位置時需考慮蛋白質(zhì)的性質(zhì)和功能，有時可能需要嘗試兩種方式以確定最佳融合位點。
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